肾癌nm23－H1mRNA表达与浸润转移的关系
作者：孔宪国 张元芳 丁强 王忠 刘本春
单位：孔宪国 张元芳 丁强 王忠 刘本春(上海医科大学附属华山医院泌尿外科，上海200072)
关键词：肾肿瘤；肿瘤转移；nm23-H1基因
癌症000127
分类号：R737.11 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)01-0088-01▲
为探讨nm23-H1在肾癌组织中的表达状况，我们采用RT-PCR方法检测25例肾癌及癌周组织中nm23-H1mRNA的表达，并探讨nm23-H1mRNA的表达与肾癌浸润转移的关系。结果报告如下：
, 百拇医药
1材料和方法
1.1病例资料和组织标本
肾癌患者25例，男19例，女6例，年龄38～74岁，中位年龄56岁。所有病例均经病理证实，其中透明细胞癌22例，混合细胞癌2例，颗粒细胞癌1例。按照Robson分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期11例，Ⅲ期5例，Ⅳ期4例。
每份标本为癌组织及正常肾组织各一份，放入液氮中保存备测。
1.2引物序列及合成
根据文献报道[1]合成nm23-H1引物，扩增片断长度为685bp，引物序列如下：
正义：5’GCAGCCGGAGTTCAAACCTAA3’
, 百拇医药 反义：5’GCTGGGAGGAAGCATTTTAATC3’
βActin内参照引物一对，扩增片断长度为776bp，引物序列如下：
正义：5’CTATTGGCAACGAGCGGTTC3’
反义：5’CTTAGGAGTGGGGGTGGCTT3’
1.3组织总RNA抽提
组织总RNA抽提按德国Qiagen公司RNA抽提试剂盒说明进行。
1.4逆转录合成cDNA
20μl逆转录反应体系包含以下成分：总RNA2μg，AMV逆转录酶20u，4种dNTP(浓度为10mmol/L)2μl，oligodT1μl，Rnasin20u，逆转录酶缓冲液4μl，双蒸水加至20μl。混匀后，42℃反应45分钟，95℃加热5分钟以灭活逆转录酶，放入-70℃冰箱中保存备用。
, 百拇医药
1.5PCR扩增及电泳、结果判定
25μlPCR反应体系包含以下成分：cDNA2μl，dNTP(2mmol/L)25μl，正、反义引物各25pmol，Taq酶2u，10×PCRbuffer(Mg2+1.5mmol/L)2.5μl，双蒸水加至25μl。混匀后，加两滴石蜡油置PCR仪上，nm23-H1的反应条件：94℃变性50秒，56℃退火1分15秒，72℃延伸1分30秒，30个循环后再72℃延伸7分钟。β-Actin的反应条件：94℃变性50秒，55℃退火1分15秒，72℃延伸1分15秒，30个循环后再72℃延伸7分钟。其中不加cDNA模板者作为阴性对照。
取PCR扩增产物8μl在1.5%琼脂糖凝胶电泳80伏30分钟，溴化乙锭染色，紫外灯下观察记录照相。根据特异性条带的弱、中等、强，分别记为+、++、+++。
1.6统计学处理
, http://www.100md.com
采用行×列表的χ2检验。
2结果
2.1nm23-H1mRNA在肾癌及癌周组织表达的差异
25例肾癌组织，nm23-H1mRNA无表达3例，低表达9例，中等表达10例，高表达3例；癌周组织全部表达，其中低表达11例，中等表达11例，高表达3例。两组表达强度无显著性差异(χ2=3.25，P>0.05)。
2.2nm23-H1mRNA在Ⅰ、Ⅱ期癌及Ⅲ、Ⅳ期癌表达的差异
25例肾癌组织中Ⅰ、Ⅱ期癌16例，nm23-H1mRNA2例无表达，4例低表达，8例中等表达，2例高表达；Ⅲ、Ⅳ期癌9例，1例无表达，5例低表达，2例中等表达，1例高表达。两组表达强度无显著性差异(χ2=2.63，P>0.05)。
, 百拇医药
3讨论
nm23基因在低转移细胞株中的表达强度是在高转移细胞株中的10倍，从而认为nm23基因是一个肿瘤转移抑制基因。nm23基因家族包括两个成员：nm23-H1和nm23-H2，其中nm23-H1与肿瘤转移更为密切[2]。
关于nm23基因与肾癌浸润转移之间的关系，国外有较多文献报道，但结论尚不一致。我们采用RT-PCR的方法研究肾癌及癌周nm23-H1mRNA的表达，结果显示，nm23-H1mRNA在肾癌及癌周组织中存在广泛的表达，肾癌及癌周组织中的表达无显著性差异(P>0.05)，Ⅲ、Ⅳ期晚期癌与Ⅰ、Ⅱ期早期癌的表达无差异(P>0.05)，说明肾癌的发生与发展与nm23-H1基因无关。nm23基因除与肾癌的转移无关外，研究还发现，在前列腺癌[3]、肺癌[4]、膀胱癌[5]等肿瘤中，nm23并不是转移抑制基因，其表达增高甚至与细胞增殖有关。有观点认为，在一些肿瘤中nm23基因显示抗肿瘤转移作用，可能是与nm23-H1连锁的或附近的一个肿瘤转移抑制基因的作用，而不是nm23-H1基因本身[3]。所以，关于nm23是否为转移抑制基因，还有待于进一步研究证明。
, 百拇医药
通讯作者：Tel：86-21-56770588-3331
参考文献：
[1]郑晓勇，林芷英，刘银坤，等.原位微环境与nm23-H1、H-rasmRNA及肝癌肝内转移的关系[J].中华肿瘤杂志，1998，20：15.
[2]Steeg PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential [J]. J Natl Cancer Inst,1988,80： 200～ 204.
[3]Igawa M,Rukstalis DB,Tanabe T,et al.High levels of nm23 expression are related to cell proliferation in human prostate cencer [J]. Cancer Res,1994,54： 1313～ 1318.
, 百拇医药
[4]Bosnar MH,Pavelic K,Krizanac S,et al.Squamous cell lung carcinomas： the role of nm23-H1 gene [J]. J Mol Med,1997,75： 609～ 613.
[5]Shiina H,Igawa M,Urakami S,et al. Immunohistochemical analysis of the nm23 protein in transitional cell carcinoma of the bladder [J]. Br J Urol,1995,76： 708～ 713.
收稿日期：1999-01-15
修回日期：1999-03-02, 百拇医药
单位：孔宪国 张元芳 丁强 王忠 刘本春(上海医科大学附属华山医院泌尿外科，上海200072)
关键词：肾肿瘤；肿瘤转移；nm23-H1基因
癌症000127
分类号：R737.11 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)01-0088-01▲
为探讨nm23-H1在肾癌组织中的表达状况，我们采用RT-PCR方法检测25例肾癌及癌周组织中nm23-H1mRNA的表达，并探讨nm23-H1mRNA的表达与肾癌浸润转移的关系。结果报告如下：
, 百拇医药
1材料和方法
1.1病例资料和组织标本
肾癌患者25例，男19例，女6例，年龄38～74岁，中位年龄56岁。所有病例均经病理证实，其中透明细胞癌22例，混合细胞癌2例，颗粒细胞癌1例。按照Robson分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期11例，Ⅲ期5例，Ⅳ期4例。
每份标本为癌组织及正常肾组织各一份，放入液氮中保存备测。
1.2引物序列及合成
根据文献报道[1]合成nm23-H1引物，扩增片断长度为685bp，引物序列如下：
正义：5’GCAGCCGGAGTTCAAACCTAA3’
, 百拇医药 反义：5’GCTGGGAGGAAGCATTTTAATC3’
βActin内参照引物一对，扩增片断长度为776bp，引物序列如下：
正义：5’CTATTGGCAACGAGCGGTTC3’
反义：5’CTTAGGAGTGGGGGTGGCTT3’
1.3组织总RNA抽提
组织总RNA抽提按德国Qiagen公司RNA抽提试剂盒说明进行。
1.4逆转录合成cDNA
20μl逆转录反应体系包含以下成分：总RNA2μg，AMV逆转录酶20u，4种dNTP(浓度为10mmol/L)2μl，oligodT1μl，Rnasin20u，逆转录酶缓冲液4μl，双蒸水加至20μl。混匀后，42℃反应45分钟，95℃加热5分钟以灭活逆转录酶，放入-70℃冰箱中保存备用。
, 百拇医药
1.5PCR扩增及电泳、结果判定
25μlPCR反应体系包含以下成分：cDNA2μl，dNTP(2mmol/L)25μl，正、反义引物各25pmol，Taq酶2u，10×PCRbuffer(Mg2+1.5mmol/L)2.5μl，双蒸水加至25μl。混匀后，加两滴石蜡油置PCR仪上，nm23-H1的反应条件：94℃变性50秒，56℃退火1分15秒，72℃延伸1分30秒，30个循环后再72℃延伸7分钟。β-Actin的反应条件：94℃变性50秒，55℃退火1分15秒，72℃延伸1分15秒，30个循环后再72℃延伸7分钟。其中不加cDNA模板者作为阴性对照。
取PCR扩增产物8μl在1.5%琼脂糖凝胶电泳80伏30分钟，溴化乙锭染色，紫外灯下观察记录照相。根据特异性条带的弱、中等、强，分别记为+、++、+++。
1.6统计学处理
, http://www.100md.com
采用行×列表的χ2检验。
2结果
2.1nm23-H1mRNA在肾癌及癌周组织表达的差异
25例肾癌组织，nm23-H1mRNA无表达3例，低表达9例，中等表达10例，高表达3例；癌周组织全部表达，其中低表达11例，中等表达11例，高表达3例。两组表达强度无显著性差异(χ2=3.25，P>0.05)。
2.2nm23-H1mRNA在Ⅰ、Ⅱ期癌及Ⅲ、Ⅳ期癌表达的差异
25例肾癌组织中Ⅰ、Ⅱ期癌16例，nm23-H1mRNA2例无表达，4例低表达，8例中等表达，2例高表达；Ⅲ、Ⅳ期癌9例，1例无表达，5例低表达，2例中等表达，1例高表达。两组表达强度无显著性差异(χ2=2.63，P>0.05)。
, 百拇医药
3讨论
nm23基因在低转移细胞株中的表达强度是在高转移细胞株中的10倍，从而认为nm23基因是一个肿瘤转移抑制基因。nm23基因家族包括两个成员：nm23-H1和nm23-H2，其中nm23-H1与肿瘤转移更为密切[2]。
关于nm23基因与肾癌浸润转移之间的关系，国外有较多文献报道，但结论尚不一致。我们采用RT-PCR的方法研究肾癌及癌周nm23-H1mRNA的表达，结果显示，nm23-H1mRNA在肾癌及癌周组织中存在广泛的表达，肾癌及癌周组织中的表达无显著性差异(P>0.05)，Ⅲ、Ⅳ期晚期癌与Ⅰ、Ⅱ期早期癌的表达无差异(P>0.05)，说明肾癌的发生与发展与nm23-H1基因无关。nm23基因除与肾癌的转移无关外，研究还发现，在前列腺癌[3]、肺癌[4]、膀胱癌[5]等肿瘤中，nm23并不是转移抑制基因，其表达增高甚至与细胞增殖有关。有观点认为，在一些肿瘤中nm23基因显示抗肿瘤转移作用，可能是与nm23-H1连锁的或附近的一个肿瘤转移抑制基因的作用，而不是nm23-H1基因本身[3]。所以，关于nm23是否为转移抑制基因，还有待于进一步研究证明。
, 百拇医药
通讯作者：Tel：86-21-56770588-3331
参考文献：
[1]郑晓勇，林芷英，刘银坤，等.原位微环境与nm23-H1、H-rasmRNA及肝癌肝内转移的关系[J].中华肿瘤杂志，1998，20：15.
[2]Steeg PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential [J]. J Natl Cancer Inst,1988,80： 200～ 204.
[3]Igawa M,Rukstalis DB,Tanabe T,et al.High levels of nm23 expression are related to cell proliferation in human prostate cencer [J]. Cancer Res,1994,54： 1313～ 1318.
, 百拇医药
[4]Bosnar MH,Pavelic K,Krizanac S,et al.Squamous cell lung carcinomas： the role of nm23-H1 gene [J]. J Mol Med,1997,75： 609～ 613.
[5]Shiina H,Igawa M,Urakami S,et al. Immunohistochemical analysis of the nm23 protein in transitional cell carcinoma of the bladder [J]. Br J Urol,1995,76： 708～ 713.
收稿日期：1999-01-15
修回日期：1999-03-02, 百拇医药